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茶叶中儿茶素的提取和纯化工艺研究综述(二)

   2013-09-28 互联网杨 焱,宓晓黎1180
核心提示:二、儿茶素的分离纯化方法   要得到高纯度的儿茶素或单一的儿茶素组分,需在前述提取分离得到的粗提物基础上进一步分离纯化。
 二、儿茶素的分离纯化方法
  要得到高纯度的儿茶素或单一的儿茶素组分,需在前述提取分离得到的粗提物基础上进一步分离纯化。最常用的方法是各种层析分离技术。
  (一)柱层析分离法
  该方法是将茶多酚粗品经一定的溶剂溶解后,上柱分离,用冼脱剂洗脱,收集儿茶素。柱层析的关键是柱填料与洗脱剂的选择。国内外报道的柱填料有三大类型:1、吸附型柱:纤维素、硅胶、三氧化二铝、聚酰胺等;2、离子交换柱:XAO23、凝胶柱:Toyopearl HW40Sephadex LH20
  龚正礼等将TP粗品经活怀碳脱色纯化,再过硅胶柱吸附,洗脱收集可得到纯度为94%的儿茶素。谷口繁的专利:将TP粗品过聚酰胺吸附柱,用水、50%甲醇、80%甲醇依次洗柱,再用99.6%甲醇洗脱,收集洗脱液,浓缩干燥,经蒸馏水溶解过离子交换柱XAO2,收集洗液,浓缩干燥得高纯度的儿茶素。Hovita H.利用凝胶柱分离儿茶素的工艺:茶叶用80%乙醇浸提,过Toyopearl HW40柱,经去离子水、15%乙醇洗涤,再用80%的乙醇洗脱收集得儿茶素液,该工艺的回收率可达5772%。冈田文雄则用凝胶过滤柱结合逆相分配层析法制备儿茶素单体,其工艺为:TP粗品过Sephadex LH20柱,经逆相分配层析,分别收集各儿茶素层析液,结晶得儿茶素单体。国内戚向阳等采用Sephadex LH20柱--40%丙酮洗脱法得到纯度较高的酯型儿茶素,该法比Saijoyoyasu以同样的柱使用甲醇、正己烷、乙酸乙酯等多种有机溶剂洗脱,简便、省时、成本低。李秉定等用葡萄糖凝胶LH20柱,无水乙醇洗脱法初步分离儿茶素,进而用不同规格的柱及不同的洗脱剂分别洗脱收集得到各儿茶素单体。
  (二)高效液相制备色谱法(HPLC
  制备HPLC主要用于分离纯化出儿茶素的单体组分。工艺流程:TP粗品经柱分离纯化出儿茶素混合,再经HPLG制备柱分离得到儿茶素单体组分。
  1989F.YayabeSephedexLH20柱预分离,经HPLC二次分离制备了儿茶素单体。最近国内已月报道通过HPLC法制得了酯型儿茶素EGCG。该方法工艺:TP粗品经葡萄糖凝胶柱层析得到酯型儿茶素组分,再注入HPLC色谱柱色谱分离,回收流动相,冷冻干燥得EGCG
  (三)高速逆流色谱法(HSCCC
  HSCCC法是80年代发展起来的新技术,其特点是高速运转产生的重力场使固定相能在分离柱中实现高的保留,从而大大提高了分离能力。
  该法属仪器分离法,溶剂系统中各溶剂在分液漏斗中混合后,上层为固定相,灌入色谱分离柱;下层为流动相,将TP粗品溶解成5%10%的溶液。当流动相流经色谱柱时,儿茶素各组分得到分离。这种分离方法是在两相之间进行,克服了使用固体吸附材料造成的样品不可逆吸附或降解的缺点,样品可最大限度地得以回收。用该法分离700mg茶多酚可得到94mgEGCG50mgECG76mgEGC74mgEC27mgDLC27mgGCG6个儿茶素组分分离只需20min
  由此可知,层析分离法的特点是能满意地分离一系列结构较为相似的儿茶素组分。
  三、展望
  随着儿茶素制品应用范围的不断扩大,对提取分离工艺的要求也逐渐提高。不仅要有高的提取率、好的产品质量,而且要考虑省时、省力、自动化程度高。超临界流体提取比常规方法的提取率高,能保持产品的天然特性,尤其是对高温易氧化物质提取更为适宜。用该方法制备的产品中无有机溶剂的残留,特别适合特作药品和食品。
  因此超临界流体是提取技术将是生产儿茶素制品的主要发展方向之一,而超临界流体提取与色谱分离和检测器联用,将提取、分离、测定合为一体,就能准确、快速、简便,在提高产品纯度的同时还能在线控制质量,若能实现工业化将是常规化学有机溶剂提取方法的一次突破性的飞跃和具有划时代意义的科技进步。  
 
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